免疫放射分析法（immunoradiometric assay，IRMA）是用过量的放射核素标记抗体（*Ab）和限量的抗原或半抗原（Ag）结合，形成Ag*Ab复合物，测量复合物的放射性，和所加Ag的量呈正相关。如以不同量的Ag标准品求出与Ag*Ab放射性的量效关系，即可从待测样品在相同条件下测得的Ag*Ab放射性求出待测样品的量。

抗原过量抗体复合物

从原理的角度讲，IRMA的主要特点包括以下几方面：

1.IRMA属于非竞争性抗原抗体结合反应，因加入的抗体是过量的（而RIA法加入的抗体是限量的）。

2.抗原抗体复合物的放射性，与所加非标记抗原的量呈正相关（而RIA法呈负相关）。

3.因为本结合反应不存在竞争性，低剂量区没有不确定因素，因此灵敏度较高。

4.分离步骤的主要目的是把 *Ab和Ag*Ab分开。由于*Ab和Ag*Ab都含γ球蛋白，分子量也比较接近，很多在RIA中常用的分离方法都不能用，需要用特异抗体作分离剂。这在很大程度上造成了IRMA在方法学上的特殊性，即几乎全部是夹心法，也就是一个IRMA系统中需要两种抗体，它们是针对同一个抗原的不同抗原决定簇，一个抗体标记后作为探测抗体，一个抗体用作分离剂。正是这一特点，使IRMA的测定对象主要限于有两个以上抗原决定簇的肽类或蛋白质。由于Ag的量越小Ag*Ab放射性越低，所以在IRMA中NSB的高低对低剂量Ag测量的准确性影响大，很重要的一点是尽量降低NSB，以提高IRMA的灵敏度。

对IRMA试剂盒的基本要求和RIA试剂盒相同，由国家批准的生产单位提供，使用者应按说明书的要求合理使用。如果临床工作需要，使用者可以对试剂稀释度、操作步骤等进行适当改动，但对改变了的方案应作精密度、准确度、灵敏度等考核，并作详细记录。

一般试剂盒都包括三种主要试剂：标记抗体、非标记标准抗原（标准品）、分离试剂或材料，若干试剂盒还提供缓冲液及质量控制用的样品。

标记抗体必须亲和力高、特异性强。通常都由生产厂家精选后用 ¹²⁵I标记，可以是多克隆（polyclonal）抗体，也可以是单克隆（monoclonal）抗体。一般说首先要保证特异性，所以多数试剂盒选用单克隆抗体。对于抗体的亲和力，通常由生产厂家测定，借用RIA的Scatchard作图法，对尚未连接 ¹²⁵I的抗体进行鉴定，然后向用户提供数据。为了保证标记抗体的特性与未标记前一致，制备标记物的条件要温和，每一抗体分子最好仅含一个 ¹²⁵I原子。由于存在 ¹²⁵I衰变等不稳定因素，厂家应当提供试剂盒的有效期。

标准品是定量的依据，要求纯度尽量高，配制时浓度应准确，并注意保存。

包括分离材料（如固相抗体），通常也由生产厂家提供。所用抗体必须和标记抗体针对不同抗原决定簇，也可以是多克隆（polyclonal）抗体或单克隆（monoclonal）抗体。该抗体预先牢固地吸附在某种固体支持物上，待测抗原中的一个抗原决定簇和标记抗体结合，另一个抗原决定簇和固相支持物上的非标记抗体结合，便能和游离抗体分开。很多固相材料可供选用，如塑料（聚乙烯、聚苯乙烯、尼龙等）试管、纤维素颗粒、凝胶颗粒（葡聚糖、琼脂糖、聚丙烯酰胺等）、多孔玻璃微球、磁性颗粒等。磁性颗粒法是将固相颗粒（如纤维素）与含铁化合物（如氧化铁）连接，再与抗体连接，此种颗粒在磁场吸引下不需离心即可与游离标记抗体分开。

IRMA方法一般也包括加样、温育、分离结合和游离部分、测放射性、数据处理等五个步骤。很多方面均和RIA相似，不再一一重复。由于不是竞争结合，当然不存在经典加样法和顺序加样法之分。但是从加样顺序及所用标记试剂的不同，又分为以下几种不同方法。

在实际应用时，先加抗原和固相抗体结合，再加标记抗体；有同时加抗原和标记抗体的；也有先让标记抗体与抗原结合，再加固相抗体的。由于抗原抗体的结合反应是在标记抗体过量的情况下进行，有不少IRMA的反应允许在室温下进行，可以缩短孵育时间，每一具体IRMA系统的加样顺序、孵育时间、孵育温度、分离条件（离心所需数及时间、或磁性颗粒用磁场吸引等） 通常都应按照试剂盒的说明书进行。最后形成下述双抗体夹心复合物：固相抗体—待测抗原— ¹²⁵I标记抗体。

这种方法是将 ¹²⁵I标记在第三抗体上，此法用作分析试剂的抗体不带标记，而标记的第三抗体则是针对该分析抗体的抗体，如果分析抗体是鼠的抗体，则第三抗体用兔（或羊或豚鼠） 抗鼠的抗体。所以这种抗体具有多用性，凡是分析抗体来自同一种动物的都可以用。第三抗体是在前两个抗体已经和抗原充分反应后再加入的。最后形成下述复合物。

固相抗体—待测抗原—非标记分析抗体— ¹²⁵I标记非标记分析抗体的抗体

为了进一步提高IRMA的灵敏度，有人建立了双标记抗体法，该法要求待测抗原有三个以上抗原决定簇，与三个抗体形成三个不同结合位点的抗原抗体复合物，其中一个抗体作分离剂，另两个以 ¹²⁵I标记，用作分析抗体。最后形成下述复合物。

BAS的引入对提高灵敏度及缩短分析时间有较明显的效果。生物素可以用来标记抗体，而且每一抗体分子可以连接几十个分子的生物素。生物素又能和 ¹²⁵I标记的亲合素牢固结合（Ka达10 ¹⁴～10 ¹⁵ L/mol），因此该系统本身的放大效应很明显。在IRMA中，用生物素标记的抗体代替 ¹²⁵I标记的分析抗体，充分反应后再加 ¹²⁵I标记的亲合素，形成下述复合物，使分析灵敏度明显提高。

固相抗体—待测抗原—生物素标记抗体— ¹²⁵I标记亲合素。

IRMA的数据处理除数学模型外，都和RIA相仿，质控也和RIA相同，现将其数学模型作一简要叙述。可以应用的曲线拟合法有以下三种：

生产厂家仍推荐这种方法。但是本法缺乏理论依据，遇有突出值时影响大。此外，有些试剂盒生产厂家迄今仍推荐直线化的方法，认为在IRMA的低剂量区域是一条直线，如果仅使用厂家指定的区域，可以用直线回归法。应当指出，这只是一 种近似的方法，无论是理论上或在精密实践中都可以证实，即使是低剂量区也不是直线，对于要求高的IRMA不宜采用。

在四参数Logistic模型上加一不对称因子，由计算机通过最小二乘回归求得五个参数。不对称因子即下式中的c。本法虽适用于IRMA的多数场合，但是不对称因子是一经验参数，并非来自质量作用定律。

函数式如下：

式中各参数的含义与RIA的四参数质量模型相同。该模型已用稳健回归法编成应用软件，多年来已在多个IRMA系统上应用。